单个细胞的DNA怎么提取 dna的提取方法
高中：原理： 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。 2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。方法步骤： 1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min 2．溶解DNA： 3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢 4．过滤：取黏稠物 5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min 6．过滤：取滤液。 7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min 8．DNA的鉴定：沸水浴5min 大学 DNA提取分为三个基本步骤，每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA结合的组蛋白。将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。 2.细胞的破碎细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。 3.DNA提取的几种方法 (1).浓盐法 A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来. B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白. 两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些. C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA. （2）.阴离子去污剂法; 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA （3）.苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态（4）.水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
如何提取单个细胞的RNA
首先严格说不是DNA的降解，是DNA被打断后形成的片段，因为一般DNA都很长，在操作过程中容易受外力的作用而断裂，形成片段，这是正常现象，提取中无法避免，只能尽量减少；
如果是降解的话，会形成弥散形的条带，条带区分不明显；
操作中注意用力要柔和，不要用力的摇晃和吹打等，所使用的枪头最好提前用剪刀斜着剪一下，使枪头孔径变大，可以保证抽吸的时候减少对DNA的剪切力；
注意加入RNA酶，降解RNA；
1.析出溶解在NaCl溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：
1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min
2．溶解DNA：
3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢
4．过滤：取黏稠物
5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min
6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min
8．DNA的鉴定：沸水浴5min
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